1.反相高效液相色谱柱在进行安装拆卸以及更换时，对接口处要拧紧但动作要轻，力量要适度，尽可能防止较强的机械振动，以避免安装等步骤出现机床空隙。
2.温度和压力的突然变化和机械震动会影响反向高效液相色谱柱的填充状况，因此要控制好温度以及压力的变化，在进行操作时，对流速的调节也应缓慢进行。
3.在逐渐改变溶剂的组成时，建议不要直接从有机溶剂改编为全部是水，同理也不建议从水直接全部变为有机溶剂。
4.在对反相高效液相色谱柱的柱内温度进行控制时，应注意柱内是否有流动相，在柱内通入流动相后再进行升温能避免对色谱柱的损坏。
5.对于柱内的杂质，一般得针对所使用的反相高效液相色谱柱是否能进行反冲，只有生产标明该款反相高效液相色谱柱能进行反冲时才能反冲除去留在柱头的杂质，否则反冲会使柱效降低。
6.对于流动相的选择也应考虑到固定相的性质，选择合适的流动相，以避免固定相被破坏。
7.对基质较复杂的样品要进行预处理或在反相高效液相色谱柱中连接保护柱以避免反相高效液相色谱柱。
8.对于不同性质的样品，如果条件允许，建议对每一类分析配置专用的反相高效液相色谱柱。
9.在反相高效液相色谱柱使用过程中，如果压力升高，要及时处理解决。
10.在使用完反相高效液相色谱柱后，应对色谱分析系统进行冲洗除杂过程。
11.在对反相高效液相色谱柱进行保存时，应将色谱柱进行密封并在柱内充满乙腈或甲醇，防止溶剂挥发干燥。
在使用反相高效液相色谱柱的过程中，操作是否得当，维护是否到位会直接影响色谱柱的使用寿命和效果，因此了解反相高效液相色谱柱使用与维护的注意事项十分重要。
