亲和色谱填料结构

更新时间：2021-12-10 点击次数：2147

亲和层析是根据一种生物分子间的特异相互作用来分离物质的层析方法，利用待分离物质与配体间所具有的特异性亲和力来达到分离目的的一类特殊层析技术。如抗原与抗体、DNA与RNA、酶与底物或抑制物等。

亲和色谱填料由基体、配体和间隔臂三部分组成。

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基体

基体是有一定粒度、一定刚性、多孔的表面有大量可反应基团的固体物质，用于支撑间隔臂和配体，在其表面通过反应键合上间隔臂和配体后制得亲和色谱填料。基体有两类：一类是有机聚合物，如纤维素、交联葡聚糖、交联琼脂糖等；第二类是多孔玻璃和硅胶。

基体应具备的条件：

1.基体是不溶性支持物，具有三维的多孔网络结构，有足够大的排阻极限，大分子能不受阻碍地进出内孔。

2.基体颗粒应该是均匀的球形并具刚性，粒度均匀，孔径分布范围小，机械性能好。

3.基体必须是亲水性及惰性的，其骨架与蛋白质或其他重要生化物质的作用必须极弱，以降低非特异性吸附。

4.基体理化性质稳定，不会被制备填料时的试剂和流动相破坏。

5.基体必须具有大量表面活性基团。

配体

配体是接到基体或间隔臂上与蛋白质分子发生作用的部分，配体的选择是亲和色谱的关键。配体有两类：一类叫特异性配体，只对一种蛋白质具有结合能力；另一类叫组特异性配体，也叫通用性配体，对某一类蛋白质具有结合能力。

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配体应具备的条件：

	配体与待分离的生物分子有特异性结合。
	配体既要能有效地与生物分子结合，亲和力相当，又能有效地与所吸附的生物分子解离。
	配体既有能特异性地与待纯化的蛋白质分子相结合的活性点，又有与基体或间隔臂相偶联的化学基团。
	配体自身应具有良好的稳定性，能耐受偶联以及洗脱时的温度变化和化学环境，制得的填料可以多次重复使用。

尽可能选择无离子基团、疏水性小的的配体。

间隔臂

亲和色谱分离对象是生物大分子，其体积大，并且只能以特定的部位与配基作用，通常因为空间位阻效应，使其作用位点不易接近配体。所以，一般在配体与基体之间接上一个有一定长度的间隔臂，使配体伸离基体表面一定的距离，就可以克服这空间阻碍。

间隔臂的两端都有能与其他基团反应的活性官能团，活性官能团如NH₂、OH、COOH等，它的一端先与基体反应，形成带间隔臂的基体，产物仍带一个可反应的端基，可以再与配体偶联。

亲水性的、无离子基团的、没有太多支链或大基团的、适当链长的小分子适合作间隔臂。

月旭科技亲和层析填料：

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1. Protein A Solid/Protein A 4FF/Protein G Tanrose 4FF 抗体亲和介质

2. Ni Tanrose 6FF（NTA/IDA）/Ni Tanrose 6HP（NTA）/Ni Tanrose 4FF （NTA/IDA）/Co Tanrose 6FF（NTA）金属螯合亲和介质

3. IMAC Tanrose 6FF/Chelating Tanrose 6FF金属螯合亲和介质

4. Benzamidine Tanrose 4FF苯甲脒亲和介质

5. GST Tanrose 4FF谷胱甘肽亲和介质

6. Heparin Tanrose 6FF/Heparin Tanrose 6HP肝素亲和介质

7. Endotoxin rem Tanrose 4FF内毒素亲和填料

8. NHS-activiated Tanrose 4FF/CNBr-activiated Tanrose 4FF预活化亲和填料