HILIC亲水作用模式知多少？

小伙伴们平时使用最多的就是反相色谱柱（RPC）和正相色谱柱（NPC），当我们遇到化合物在正相模式下强保留，在反相模式下不保留或保留很弱的情况时该怎么选择色谱柱呢？

相信小伙伴们的第一反应是用HILIC色谱柱，那今天小编就和大家分享一下亲水模式色谱柱的作用机理和日常维护，希望对大家有所帮助。

HILIC柱也叫亲水作用色谱柱，是正相色谱柱的一种变化，即固定相是极性填料，使用的流动相是甲醇、乙腈、水等极性溶剂。极性物质在亲水作用色谱里优先被保留，这意味着很多在反相色谱里保留很弱的物质可以使用亲水作用色谱分离。

亲水模式色谱常见的固定相键合类型有：纯硅胶、氰基、二醇基、酰胺基和两性离子等。

在HILIC模式下，溶剂极性顺序：水>甲醇>乙醇>异丙醇>乙腈>丙酮，在此模式下不建议同时使用水和甲醇作为流动相，因为这两种溶剂的洗脱能力强。

HILIC模式的保留机理综合了液液分配、离子交换作用和氢键作用，具体如下：

//溶质分子首先在主体流动相与色谱填料表面的半固定的高极性水膜之间发生液液分配；

//次级保留作用包括色谱填料表面硅醇基和/或极性官能团与带电分析物间发生的离子交换作用；

//氢键作用发生在带正电的分析物与带负电的表面硅醇基之间。

其主要应用包括：

1、分离在反相色谱上不保留或保留较弱的化合物；

2、分离正相模式下强保留化合物。

新柱是保存在纯乙腈中的，所以小伙伴们拿到色谱柱后需先用纯乙腈低流速活化后再使用（若测试方法中使用了含缓冲盐的流动相，先用70%乙腈水过渡）。

HILIC系列色谱柱的日常维护和保存（建议反冲）：

当色谱柱使用一段时间后，出现压力升高、峰形异常、柱效降低、分离度下降等异常情形时，先用过渡流动相（70%乙腈）冲洗掉色谱柱中的缓冲盐，再按照如下方式冲洗（建议反冲）：

HILIC Amide柱、HILIC-NH₂柱、HILIC-Silica柱