蛋白含量测定常用方法有哪些？

蛋白纯化是目前生物研究邻域中较为热门的一个大方向，其中蛋白含量测定是纯化过程中很重要的一项内容。

zui常用的蛋白含量测定分析方法有：马斯亮蓝法（Bradford）、Folin-酚试剂法（Lowry）、BCA法等。

Folin-酚试剂法（Lowry）：蛋白质在碱性溶液中肽键与Cu²⁺鳌合，形成蛋白质-铜复合物，还原酚磷钼酸，产生蓝色化合物，蓝色深浅与蛋白质浓度呈线性关系。灵敏度在1-5μg/mL，是目前zui灵敏的测定方法，但耗费时间长，操作需严格计时，颜色深浅随不同蛋白质而变化，因为其中的酒石酸钾-硫酸铜试剂配置保存困难，逐渐被考马斯亮蓝法取dai。

考马斯亮蓝法（Bradford）：考马斯亮蓝G-250染料与蛋白质结合呈蓝色，在波长595nm有吸收峰，在一定的范围内与蛋白质的含量呈线性关系。灵敏度在25-250μg/mL左右，应用广泛，颜色稳定，专一性较差，干扰物质多。

BCA法：BCA法基于双缩脲原理，碱性条件下蛋白质将Cu²⁺还原成Cu⁺，BCA鳌合Cu⁺作为显色剂，产生蓝紫色并在562nm有吸收峰，单价Cu⁺与蛋白质呈剂量相关性。灵敏度在0.5-20μg/mL之间，用于快速检测，抗干扰能力强，但受金属螯合剂影响。

每种测定方法都不是wan美无缺的，都有其优缺点，在选择时应考虑：

① 试验所要求的灵敏度和精确度；

② 蛋白质的性质；

③ 溶液中存在的干扰物质；

④ 测定时所耗费的时间等因素。

就具体情况选择最合适的试验方法。