亲和层析中的蛋白洗脱

亲和层析是根据一种生物分子间的特异相互作用来分离物质的层析方法，利用待分离物质与配体间所具有的特异性亲和力来达到分离目的的一类特殊层析技术。如抗原与抗体、DNA与RNA、酶与底物或抑制物等。

从亲和层析填料上洗脱结合靶标是结合的可逆过程，需优化条件，削弱靶标和配基之间的相互作用。洗脱条件不应使靶蛋白变性，除非这些条件与下游程序兼容。

有两种类型的洗脱方法，即特异性洗脱和非特异性洗脱。

特异性洗脱过程中，介质或竞争配基或竞争靶标，通过这种形式攻击蛋白质-配基复合物，继而将靶蛋白释放至溶液中。用于洗脱的竞争介质的浓度和量（体积）依赖于其亲和力，这种亲和力与固定复合物的亲和力相关。与亲和力强的添加物相比，竞争介质的结合越弱越需要更高的浓度和更大的体积。对于弱的竞争介质，比配基高10倍是较好的浓度起点。特异性洗脱通常是温和的，更可能保留蛋白质的活性。这种方法的缺点在于：洗脱慢、洗脱峰宽、需要从回收的蛋白质中去除竞争介质。

对于非特异性洗脱，需根据配基与蛋白质之间的相互作用机制优化洗脱条件，如增加盐浓度、降低离子相互作用或通过改变pH来改变质子化/离子化状态，从而调节氢键强度、疏水相互作用及静电相互作用。从固定的Protein G上洗脱抗体就是一个改变pH的例子，然而Protein G与抗体的亲和力非常强，需要不同洗脱条件组合达到zui大程度的抗体释放。通常，亲和作用需要靶蛋白正确地三维折叠，因此离液剂或影响蛋白质折叠的试剂可用于洗脱目标蛋白质，但是，必须注意保证靶标的正确折叠在洗脱后迅速恢复天然条件。当亲和力弱时，高浓度靶分子结合后，通过稀释以解离、洗脱复合物。

月旭科技可提供的亲和层析填料

◌ Protein G Tanrose 4FF抗体亲和介质

◌ Ni Tanrose 6FF（NTA/IDA）/Ni Tanrose 6HP（NTA）/Ni Tanrose 4FF（NTA/IDA）金属螯合亲和介质

◌ Co Tanrose 6FF（NTA）金属螯合亲和介质

◌ IMAC Tanrose 6FF/Chelating Tanrose 6FF金属螯合亲和介质

◌ Benzamidine Tanrose 4FF苯甲脒亲和介质

◌ GST Tanrose 4FF谷胱甘肽亲和介质

◌ Heparin Tanrose 6FF/Heparin Tanrose 6HP肝素亲和介质

◌ Endotoxin rem Tanrose 4FF内毒素亲和填料

◌ NHS-activiated Tanrose 4FF/CNBr-activiated Tanrose 4FF预活化亲和填料

月旭科技可提供预装柱供您选择