疏水层析中的蛋白洗脱

蛋白质结合于填料之后，必须再将目标蛋白质洗脱，并收集层析柱柱后的流出液。多数情况下，洗脱过程用于将不需要的蛋白质从目标蛋白质中分离或者去除。不需要的蛋白质可能与填料结合的不是那么紧密，因而会先于目标蛋白质被洗脱。另外一些情况下，不需要的蛋白质会与填料结合更加紧密，并会在目标蛋白被洗脱之后仍与填料结合。这种情况通常发生在疏水层析法（HIC）分离蛋白质多聚体时，目标蛋白多聚体与填料的结合比单体与填料的结合更加紧密。在洗脱过程中，流出液组分可能含有高纯度产品，但在其之前或之后也会含有大量的不需要的蛋白质杂质。洗脱过程（梯度洗脱）如图所示，该图说明用HIC分离纯化时，在洗脱步骤中，应将柱后流出液进行等份收集，这样才可以获得适宜纯度的产品。