在制备纯化中,上样量可以细化为两类:理论最大上样量和有效最大上样量。
理论最大上样量指的是不考虑任何分离因素的影响,仅仅考虑填料对样品的承受能力。对于不同种类的色谱填料,因为基质不同,键合相不同,分离作用原理不同,造成单位重量的填料对样品的分离能力也有所差异。例如最常见的裸硅胶填料和C18硅胶填料,键合相分别是硅醇基团和C18。通常裸硅胶的理论最大上样量是硅胶量的1/10, C18硅胶填料的理论最大上样量是填料量的1/50。
而在实际使用中,样品的分离度,样品的溶解度都会影响我们上样情况。因此实际上我们在日常中提到的分离度更多指的是有效最大上样量。
分离度和溶解度对上样量的影响主要决定是否要超载进样和超载进样的方式。
首先是分离度,当目标物和杂质分离度很高,可以加大进样量。随着进样量的加大,分离度变小,直到会影响到分离纯化收率和纯度要求。如果分离度不好就降低上样量。因此分离度决定是否要采取超载进样。
其次是溶解度,它决定了超载进样的方式。样品溶解性好,则首xuan浓度超载。进样体积不变,增加样品浓度,样品峰从对称高斯峰形转变成三角形,峰展宽较小,分离效果好。样品溶解性差,则选择体积超载。增加进样体积,峰高稳定,峰形变宽,成平头峰。但是选择体积超载会存在样品析出风险。