凝胶过滤层析中的重要参数

凝胶过滤层析是利用具有多孔网状结构的凝胶颗粒的分子筛作用，根据被分离样品中各组分分子量大小的差异进行洗脱分离的一项技术。今天主要为大家介绍一下凝胶过滤层析中的一些重要参数。

#1 凝胶颗粒大小

指不能进入凝胶颗粒内部孔隙的最小分子的分子量。排阻极限反应某种凝胶能有效分离的最大分子量，所有大于排阻极限的分子均被*排阻，不能分离。如Tandex G25的排阻极限为5000Da，它表明分子量大于5000Da的分子为全排阻。

所能进入凝胶内部孔隙的最大分子和最小分子的分子量范围。它表示一种凝胶适用的分离范围，如Tandex G25对球形蛋白的分级分离范围为1000-5000Da，它表示通过Tandex G25可有效分离分子量在这个范围内的球形蛋白。

柱内凝胶颗粒之间的空隙体积的总和，用V_o表示。

干胶溶胀后颗粒本身所固有的体积，用V_g表示。

凝胶颗粒内部孔隙体积的总和，或者为小分子溶质可渗透进入凝胶内部体积的总和，又称固定相体积，用V_i表示。

凝胶柱装成后从柱底板到凝胶沉积层表面的总体积，又称床体积，用V_t表示。

式中，K_d是分配系数；V_e一般介于V_o和V_o+V_i之间。对于*排阻的大分子，由于其不进入凝胶内部，只能在颗粒间隙中流动，故其洗脱体积V_e=V_o；而对于*渗透的小分子，由于它可在整个凝胶柱内流动（忽略V_g），故其洗脱体积V_e=V_o+V_i；分子量介于两者之间的分子，它们的洗脱体积也介于两者之间；一些吸附蛋白在最后洗出。