亲水作用色谱法的优点和常见问题

常规应用于HILIC色谱的固定相有：纯硅胶柱、氨基柱、酰胺基柱、两性离子柱等。纯硅胶柱有固定相不易流失的优点，在使用CAD、ELSD和LC-MS检测器时，zui受huan迎；氨基柱，在HILIC色谱中的应用，特别适合碳水化合物（糖类）分离；两性离子柱，不再需要使用离子对试剂，具有ji强的亲水性，能够有效地保留RP-LC中保留弱或不保留的强极性离子型化合物以及碱性药物分子。

同样是Silica，NH₂，与用于正相色谱中的色谱柱不同，专为HILIC色谱设计的色谱柱，可以用于水-有机物的流动相中，换句话说，HILIC色谱对固定相的耐水性要求更高，否则会因固定相的水解，出现基线噪音大、色谱柱寿命短等问题。所以用于正相色谱中的色谱柱，不一定能用于HILIC色谱。而适用于HILIC色谱的色谱柱，可以用于正相色谱中。

极性溶质在亲水作用色谱里优先被保留，这意味着很多在反相色谱里保留很弱的物质可以轻松地使用亲水作用色谱进行分离。

亲水作用色谱有以下几个潜在的优点：

与反相色谱法相比，亲水作用色谱中最常见的问题应该是不理想的峰形（前沿或者拖尾）。这正反映了亲水作用色谱作为一种新的分离方法还没有得到如RPC一样广泛应用的事实。亲水作用色谱可能还在使用A类硅胶作为填料。我们还需要继续改良HILIC色谱柱以及想办法对峰形进行改善。

当遇到峰形问题时，第一个尝试的方法应该是增加流动相中缓冲液的浓度。有些样品要求缓冲液浓度高达100mmol/L才能得到比较好的峰形。一般情况下样品应该用流动相溶解，但有时为了改善峰形，可以把溶解样品用的有机溶剂的比例增加。如果峰形还是没有得到改善，那么就可以考虑更换柱子或者调整流动相的pH。流动相中应该一直含有一定量的水，水的比例至少应达到3%-5%。

在运行质谱检测的时候，有些键合相柱会发生柱流失的问题。通常的解决办法是改用硅胶柱或者别的键合相的色谱柱。有文献指出，使用亲水作用色谱时，某些样品组分会与硅胶柱产生不可逆的结合，这时可以考虑改用键合相的HILIC柱。