提效减耗！HPLC方法如何转换为UHPLC方法？

● 相同的选择性：选择相同品牌，相同键合工艺制成的填料仅仅是粒径不一致。

● 相同或者更大的柱长粒径比：这是保证具有相当或者更高的理论塔板数。

2. 样品浓度不改变，进样体积与柱体积成正比

例如：

HPLC柱：4.6*150mm，5μm 进样体积：20μL

UHPLC柱：2.1*100mm，进样体积则为：

3. 梯度洗脱程序的转换

等度方法只需要调整流速和进样量，如果是梯度洗脱则需调整梯度洗脱程序。调整的依据，需计算在几何缩放的流速下输送相同倍数柱体积溶剂到目标柱需要的时间。

同时，由于不同仪器之间系统体积存在差异，也需要在转换时加以考虑。梯度程序转换的计算过程这里不做详细描述。通常色谱仪器均配备转换软件，输入原始洗脱程序，软件可自动计算并转换为目标仪器的洗脱，然后根据色谱峰分离情况进行人工微调。

1. 改善分离度：调整梯度洗脱程序，增加长度是便捷可行的措施；

2. 如果破坏试验检测的杂质情况不一致，转换后的杂质多且物料平衡优于前者，两者测定结果没有明显区别，转换成功；

3. 如果结果明显不一致，或涉及不合格情况，应汇报相关负责人，是否需要对原方法进行再评估或放弃方法转换。

1. 原则：系统适用性实验不符合要求；

2. 分离度调整后达不到要求；

3. 破坏性实验检测出来物料平衡明显不如HPLC法，方法优化后不能解决；

4. 检测结果与HPLC不一致，甚至出现不合格，那需要对原方法进行评估或者放弃方法转换。

1. 原则：系统适用性实验符合要求；

2. 峰纯度达到要求；

3. 分离度达到要求；

4. 灵敏度达到要求；

5. 没有系统适用性要求的项目进行样品2-3种条件的破坏性实验，杂质分离和物料平衡均要相当。