抽丝剥茧探案四：液相系统压力高，还可能是这个原因

Hello小伙伴们大家好，液相色谱是我们常用的大型分析仪器之一，原理及操作我们自然是非常的熟悉了，但每次提到液相色谱故障排查的时候有些小伙伴就会头疼了，那种肉眼可见的堵和漏是比较容易解决的，难的是那种不重现没有规律的问题。今天小编就给大家揭秘液相与光化学衍生器联用的故障排查实例一则，思路和逻辑很重要，记得做笔记奥。

卷宗案情陈述

事情是这样的，客户做黄曲霉毒素检测，购买了WelView光化学衍生器后，客户反馈系统压力高，超压停机，另外黄曲霉毒素G1和G2分离度也达不到药典要求，也就是R＜1.5。客户申请了其它品牌液相的工程师，解决了所用液相堵塞问题，但是超压问题依然存在，于是又申请我们的售后小哥哥上门排查光化学衍生器。

月旭售后黄探长奔赴案发现场

由于客户陈述过使用其它品牌ODS-2色谱柱分离度达不到药典要求，我们的黄探长申请了月旭新色谱柱，并携带标准品奔赴客户现场了。

黄探长明察秋毫排查故障原因

接下来我们先分析下客户存在的问题：

1、LC-20AT+FLD液相系统搭配光化学衍生后超压报警停机，由于客户自动进样器能承受的最大压力是20Mpa，超过设定值系统会自动停止工作。

2、色谱柱分离效果不佳，达不到药典要求，分离度不佳跟色谱柱有直接关系，换柱子是最直接快速高效的方法。

实验条件：

流动相

MeOH：ACN：H2O=40：18：42。

检测器FLD 

激发波长365nm，发射波长450nm。

黄探长到现场后首先要排查原因，具体步骤如下：

1、观察光化学衍生器开机正常，结合之前客户的色谱图，判断衍生效果良好。

2、排查系统压力高原因，我们售后小哥更换上月旭ODS-3新的活化好的色谱柱后，比较前后压力，排查是否是旧柱子的原因。压力依然高，并非柱子堵塞。

3、拆掉柱子系统背压0.9Mpa，无堵塞现象，排除液相系统堵塞原因。

4、通过上述三步排查后，猜测可能是系统未平衡好，于是再次平衡1h，系统压力17Mpa，依然较高，无法串联光化学衍生器使用。

5、于是黄探长考虑温度对柱压的影响，将柱温箱温度设置为40℃，平衡好后压力降至12-13Mpa，串联好光化学衍生器。

6、待系统稳定后，进样25μL混标，出峰正常。

7、鉴于之前客户使用其他品牌ODS-2色谱柱分离度达不到药典要求，黄探长分别使用ODS-3及XB-C18两种不同的色谱柱供测试。

可以看出月旭ODS-3符合药典要求，客户对衍生效果也非常满意。问题解决。

案情回顾总结

黄探长的工作圆满完成，我们回顾一下整个案子的过程便于总结经验。在以后的工作中遇到问题，可以独立判断原因。

接下来我们来了解下液相系统压力的影响因素。

案情拓展：液相系统压力影响因素

影响系统压力的因素主要有流动相的溶剂组成、温度及流速这三方面。

１、流动相的粘度是产生反压的主要原因，下图为有机溶剂－水的粘度随组成与压力的关系图：

由上图可以看到，乙腈－水比例为（20：80）、甲醇－水比例为（40：60至50：50）时，系统的压力最大。因此，在做实验时应尽量避开这个比例范围。另外，异丙醇粘度大，一般不作流动相使用。

２、流速对反压的影响是线性关系，流速增加，反压亦增大。

３、温度对反压的影响是反比关系，温度升高，反压降低，对某些流动相的影响更大一些。

４、液相色谱仪各模块之间的连接管路也会产生压力，系统压力与管路的长度成正比，与管路直径的四次方成反比（1/4D）。上述考虑的是柱外因素对系统压力的影响，色谱柱对系统压力的影响也很大，反压与色谱柱长度成正比，与填料颗粒度的平方成反比（2.5μｍ填料比3.5μｍ填料反压高）。

常见压力变化及原因

造成压力高问题的主要原因：

１）温度太低；

２）流速太高；

３）流动相粘度大；

４）管路堵塞；

５）仪器或色谱柱堵塞；

６）压力传感器问题。

产生压力低情况的可能原因：

１）系统内有渗漏处；

２）单向阀堵塞；

３）入口管路有气泡；

４）溶剂滤头堵塞；

５）所用溶剂不正确，储液瓶中无溶剂；

６）温度太高，流速太低；

７）泵未输送流动相；

８）泵关闭或保险丝断了。

造成压力波动问题的主要原因：

１）管路脱气机排气不充分；

２）流动相未正确脱气；

３）所用溶剂不混溶或易挥发；

４）压力传感器及泵问题。