色谱柱伤不起！关于液相色谱柱使用的6大注意事项

流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成。原则上，所有经过色谱柱的流动相均应过滤，但在实际操作上应视具体情况而有所区别：当有机溶剂用色谱纯级，水用石英亚沸水或其它超纯水时，在能确保水和有机溶剂的质量且没有受到污染时，过滤并无更多实际意义。

当流动相中含有缓冲盐时，则过滤是必要的，如前所述，当缓冲溶液放置一段时间，在使用前还应重新过滤（含有缓冲盐的流动相，长菌较快，建议现用现配）。

所配制的样品试液在注入流路系统前均要经0.45μm(0.22μm则更好)孔径滤膜过滤。要注意区分水系和油系，二者不可混用，以防止滤膜溶解而造成污染。

装流动相的容器和色谱系统中的在线滤器要定期清洗和更换，以避免滤器因过载而起不到过滤作用。

当样品中含有对色谱柱有损害的化学成分，如产生永jiu性吸附的蛋白质、糖等有机分子和强吸附性物质，以及可能对柱填料产生破坏作用的基团离子。在进样前应尽可能对样品进行分离提纯以除去多余杂质组分。

虽然高效液相色谱柱能耐受的压力可达6000psi (磅/平方英寸)，但过高及过大的压力变化均会缩短色谱柱的寿命，避免的方法是：

1）柱压过高时，尽可能采用较小的流速，以不超过柱最大允许压力的一半为宜。

2）当流速较大时，应采取流速梯度的办法使流速分步到位。

3）使用手动进样阀时，进样阀的切换要尽可能的快。否则超过20%的压力冲击会很快使柱报废。当使用多柱联用时，柱切换要避免在高压下进行。

一般以硅胶为基质的色谱柱最高使用温度不超过60℃，以低于40℃为宜，特别是在流动相pH接近使用限度时，更应降低使用温度。

温度过高会加快键合相的水解和硅胶的溶解，从而使填料性质改变，柱床塌陷，降低柱效，改变峰形。

请您留意色谱柱说明书中的pH适用范围，目前市面上大部分键合硅胶色谱柱表示的pH适用范围是2-10，但在实际使用时应避免ji端的pH条件。（当pH≤2时，建议使用月旭Ultimate^® LP系列色谱柱；当pH≥8时，建议使用月旭Xtimate^®系列色谱柱）。若您原有的色谱柱在偏碱性条件（pH≥8）下使用，可通过以下方法避免柱损害：

1）在泵和进样阀之间加装预柱（饱和柱）来饱和流动相。

2）降低使用温度。

3）检验完毕后立即用与所使用的流动相互相混溶的“温和溶剂"彻di清洗。

开始试验前，应了解柱中当前是何种溶剂。对于新色谱柱，如无特殊说明均为评价报告中所用流动相。柱中当前溶剂一定要与分析样品所用流动相互溶，如不能混溶，要用与二者均能相互混溶的第三种溶剂过渡。

保护柱的作用：过滤掉来自流动相和样品的化学“拉圾"同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。尽管现在的色谱仪在流动相吸入口、进样阀后部以及在色谱柱的两端都装有不同孔径的在线过滤器，但在线过滤器只能除去不溶性颗粒而不能除去化学污染，因此，加装保护柱是必要的，特别是在分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时更是保护分析柱bi不可少的措施。

保护柱填料应与分析柱一致，粒径可较分析柱大。保护柱属消耗品，经过一定次数的样品分析（50～100次）后，出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时，应考虑更换保护柱。