等度洗脱VS梯度洗脱，如何选择？

哈喽，有液相实验经验的小伙伴应该都清楚，在考察液相色谱分离条件时，最重要的参数就是洗脱条件。其中洗脱条件又分为等度洗脱和梯度洗脱。下面小编就简单带大家来看下这两种洗脱方式的优点和缺点，以及他们的适用范围。

01、等度洗脱

是指在样品组分的分析周期中，流动相的组成比例和流速恒定不变的洗脱方式。

优点

1、对于等度洗脱而言，由于方法运行时，流动相的比例不发生变化，所以它对仪器的要求不高，只需要一个单元泵就可以运行方法。

2、由于等度洗脱条件单一，所以比较容易用来摸索方法设置，例如改变流动相比例，改变柱温等条件。

3、由于等度洗脱每次运行时的流动相比例相同，所以相同方法运行多个样品时，样品之间不需要设置平衡时间来让系统恢复到所需的流动相比例。

缺点

1、越往后出峰的组分色谱峰越宽。

2、并且大多数等度洗脱的方法分析时间较长。

02、梯度洗脱

是指在同一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比的洗脱方式。

优点

1、梯度洗脱能够规避掉等度洗脱的问题，例如梯度洗脱的样品峰，无论先出峰还是后出峰的组分，它们的峰形基本都能保证尖锐对称。

2、由于梯度洗脱通常设置的流动相比例是让洗脱强度越来越强，这样能保证在较短的时间内，让样品中强保留组分也能被洗脱出来。

缺点

1、如果在运用梯度洗脱时，流动相比例变化过快，可能产生鬼峰影响检测。

2、梯度洗脱对仪器的配置要求较高，通常需要配置四元泵或者二元泵。

3、梯度洗脱每次运行样品之间，需要设置一定的平衡时间，来让系统中流动相的比例到达初始流动相比例。

4、梯度洗脱的方法设置复杂，例如影响分离的：有初始流动相比例、流动相的梯度变化、结束流动相比例、柱温箱温度等，所以方法的开发和优化会较为复杂。

03、适用范围

用梯度洗脱还是等度洗脱，主要看杂质与杂质、主峰、溶剂峰的分离的情况。同一物质有梯度洗脱和等度洗脱两种条件时，梯度洗脱的认可度较高。下面就是更适合梯度洗脱的适用情况。

1、多组分样品的极性范围大，用等度无法全部洗脱的样品。

第一种情况：杂质和主成分极性相差很大，长时间杂质未能洗脱出来，就必须考虑用梯度。

第二种情况：杂质极性比主峰的大，等度时要想主峰时间合适杂质全堆在前边，杂质分开主峰又出峰太晚，这种情况也得考虑梯度洗脱。

2、大分子量样品（肽、蛋白质、合成聚合物等）一般采用梯度洗脱分离会更好，尤其是反相条件。这类样品，往往对有机相的量特别敏感，有机相的微小变化就会使样品的保留时间发生很大的变化，导致用等度条件检测时，无法使保留时间控制在一个稳定合适的范围内。

3、改善峰型。

4、目标峰出峰后，短时间内提高有机相比例，洗脱强保留干扰杂质。

5、用等度洗脱无法达到分离的情况。有些物质，特别是结构相近的物质，等度条件下无法达到分离，而采用梯度模式，因组分在有机相变化的选择性差异，可以达到分离，这种情况下就需要采用梯度条件进行测试。