正相色谱和反相色谱的区别、适用范围

正相色谱（NPC）是采用极性固定相（如带有二醇基、氨基、和氰基的固定相及硅胶等），流动相通常使用比键合相极性小的非极性或弱极性有机溶剂，如烃类溶剂，或其中加入一定量的极性溶剂（如氯仿、醇、四氢呋喃、乙腈等），以调节流动相的洗脱强度。是一种根据目标物的极性差异将其分开的液相色谱技术。

一般认为正相色谱的分离机制属于分配色谱。

● 在正相色谱中，样品分子与载体基质的硅醇基团发生特异的极性相互作用，与固定相产生强极性相互作用的极性样品分子比较难被洗脱，在柱内停留比较长的时间。

● 反之，极性较弱或非极性分子与硅胶之间产生相对较弱的相互作用，比较容易被洗脱，因而在柱内停留的时间较短。组分的分配比K值，随其极性的增加而增大，但随流动相中极性溶剂的极性增大（或浓度增大）而降低。

● 同时，固定相的极性越大，组分的保留值越大。

因此，正相色谱可以根据目标物的极性差别而达到分离目的。

在正相色谱分离中，可通过薄层色谱法（TLC）选择合适的流动相。

正相色谱常用的四种固定相，极性大小顺序是：

硅胶>氨基>二醇基>氰基

正相色谱的适用范围：

1）适合用于分离异构体；

2）适用于绝不溶于水的化合物；

3）适用于分离在反相色谱中不保留或极性较强的化合物，比如生物碱、核苷酸类、有机酸等。

反相色谱（RPC）是指利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂、水溶液为流动相，根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。

● 反相色谱的固定相大多是在硅胶表面键合疏水基团，基于样品中的不同组分和疏水基团之间疏水作用的不同而分离。

● 在生物大分子分离中，多采用离子强度较低的酸性水溶液，添加一定量乙腈、异丙醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作为流动相。

● 样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱保留更强，后出峰。

反相色谱常用的固定相种类有：

C18、C8、C4、C3、C1、苯基、C30、PFP等。

反相色谱主要应用于相对分子质量低于5000，特别是1000以下的弱极性和非极性小分子物质的分析和纯化，如蛋白质、肽、氨基酸、核酸、甾类、脂类、脂肪酸、糖类、植物碱等含有非极性基团的各种物质。