利巴韦林化学名称为：1-b-D-呋喃核糖基-1H-1,2,4-三氮唑-3-羧酰胺。又称三氮唑核苷或病毒唑，是一种能抑制核酸合成的广谱抗病毒yao。
传统的HPLC法均采用十八烷基键合硅胶色谱柱检测利巴韦林，但是该柱填料存在一些缺点。一方面硅胶填料键合的C18链会脱落，在较高的pH条件下，硅胶基质易降解；另一方面，由于利巴韦林分子结构上含有机氮基团，在硅胶基材的色谱柱中，会因色谱柱填料中残存的硅羟基与有机氮结构产生氢键吸附，导致样品部分地粘附在色谱柱的填料上，从而造成峰形拖尾和柱压升高。
月旭材料科技（上海）有限公司推出的专用于利巴韦林分析的色谱柱，系采用高品质离子排阻色谱填料——磺化聚苯乙烯/二乙烯基苯填料填装制成的氢型强阳离子交换色谱柱，符合美国25版药典收载的利巴韦林含量测定HPLC测定法，以及中国2005版和2010版药典中对色谱柱的要求。具有耐酸、耐高温的特点，并可通过提高柱温提高分析效率。
使用步骤：
1．用两通取代色谱柱将仪器连接，用过滤好的超纯水冲洗仪器50ml；
2．再用分析流动相冲洗仪器50ml，将流速降到0ml/min；
3．将Xtimate® Sugar-H色谱柱连接在 HPLC系统上；
4．设置流速在 0.2-0.3ml/min直到柱温达到设定值；
5．在柱温达到设定值时，流速增至分析流速，流速变化以0.1ml/min为增量,待反压稳定后再继续增加流速。zui大流速不应使压力超过1500psi。
流动相要求：
常用5~10 (mmol/l)的硫酸作为流动相。推荐的流动相用去离子的无菌水配制，水应去离子化 ,大于2兆欧的电阻率 ,水中应不含多价离子 ,尤其是过渡金属元素和重金属离子。使用前需用真空泵通过0.45um或更小孔径的滤膜除去细菌和其它颗粒，溶剂过滤推荐使用溶剂过滤器。
虽然流动相已经在真空过滤时脱气,但还是应该通过以下程序来*脱气. 如果系统连续使用不止一天 ,请将流动相置于锥形瓶中 ,放在搅拌器 /电炉上 ,用铝箔封上瓶口以减小蒸发,用前将流动相烧至沸点几分钟,使用时保持温度 70‐90℃.这个操作能够保证气体 (尤其是CO2)不再重新溶解在流动相中,同时也会防止微生物的滋生。
要保持装流动相的容器干净,有盖,且新鲜 ,流动相需每 24小时重新配制。
注意事项:
通常推荐压力不超过 1500psi；
zui大流速推荐不超过 0.6ml/min(70℃) ；
流动相中有机相的zui大含量为5%(V/V),样品中少量的乙腈,乙醇,甲醇和异丙醇不会影响柱子的性能；
柱子的温度不要超过 95℃.通常高温会带来高的分辨率,但在 90‐95℃之间几乎没有变化，70℃以下对于许多糖,就异构体的分离来说不能提供足够的分辨率,对于乙醇的定量,柱温应在75℃；
柱温的快速变化不会对柱子带来什么反作用,如果柱子在 60℃以下,那么zui高的流速为0.2ml/min,由于水在低温时的高的粘度因此高的流速会带来很高的反压；
定期反向冲洗色谱柱(在每 5L流动相之后),这将会有效地延长色谱柱的寿命；
流速的变化不能超过0.5ml/min,流速变化应该缓慢进行,建议改变流速时以0.1ml/min为增量,直到反压稳定后再继续增加流速.任何的流速变化均要在不超过 0.5ml/min下进行；在溶剂输出系统中压力限制的设定应比普通的工作压力高出几百psi,从而避免任何仪器未被注意的额外压力升高。
保存条件:(72小时以上不用)
关掉柱温箱,待柱子冷却至室温，停泵。
当柱子冷却后,从系统中移出,换上塑料堵头,防止保存溶剂挥干,通常的流动相都可作为保存柱子的适宜溶剂.在冰箱中5℃保存(不要冷冻),以防止微生物的滋生；
柱子拆掉后要用两通连接在系统上, 先用水冲洗整个液相色谱系统,然后用甲醇,zui后仪器系统保存在甲醇中。
在关机后的重新启动
当开启带有一个柱温很低的柱子的系统时,打开柱温箱,流速开始不要超过 0.2ml/min.待系统在此条件下稳定至少二十分钟达到工作温度后再按通常的工作条件操作。
整夜的停机(放置少于 72小时)
柱子留在系统中流速降到 0.2ml/min.循环溶剂,将流出的管路插入流动相瓶中,如果不想开着柱温箱,那就关掉柱温箱让其冷却。
在整夜停机后的开启
打开柱温箱,流动相的流速不要超过 0.1‐0.2ml/min,保持此流速至少二十分钟直到达到柱子工作所需温度,然后再按照通常分析条件来设置。
故障检查
Sugar‐H是以树脂的膨胀形态紧密装填的,如果样品进行了很好的前处理,那么大部分产生的问题都和树脂填料有关,由于单向阀的损坏或是突然地反压增加, 脆弱的树脂填料可能被泵的波动冲到柱子的后筛板处.反压的增加是否会发生,要经常检查在线过滤器以及保护柱中是否截留了微粒.如果不是此问题,那么很可能是树脂部分地堵在了出口端的筛板处,检查这种情况是否发生需要关掉泵,将柱子的流路方向反过来,然后泵流速开到 0.1ml/min,20分钟达到工作温度后再设至工作时的流速。
柱子的再生步骤:
Sugar‐H柱子的再生方法根据相关的样品纯度有不同的变化,越是天然物,(尤其是含有那些重金属和过渡金属元素或是有机酸的样品)越需要经常地对柱子进行再生,因为它们会与柱子发生置换。
如果利巴韦林的峰有拖尾,那么柱子需要做以下处理:
配制 500ml的再生溶液(pH2.5的稀硫酸), 把柱子流路方向反过来,在 90℃下以0.5ml/min的流速冲洗一整夜.再生之后回到正常方向使用。当柱子反冲时很重要的一点是需要保持溶剂的温度从而确保正确的冲洗,用冷的溶剂将会延缓冲洗的过程。
