Topsil色谱柱说明书

色谱柱使用
1.取出色谱柱，仔细查看柱身洗脱液流向箭头标识，用手旋下柱两端的塑料堵头，放好色谱柱，使洗脱液流向和柱身所示流向一致，如图所示：

2.用手将“连接管路的不锈钢或者其它材质的接头”旋入色谱柱两端，管路接头要和色谱柱接口连接紧密，确保零死体积连接，在色谱仪正常运行时没有漏液。

色谱柱保存
1.短期保存：间隔不超过四天，色谱柱按平时维护程序冲洗至基线平稳，反相色谱柱保存在不带有缓冲盐、离子对试剂的有机相/水溶液中，有机相不低于20%；正相色谱柱正相使用保存在纯正己烷中，反相使用保存在纯有机溶剂中；并将随柱的塑料堵头旋紧密封。

2.长期保存：反相色谱柱保存在80%甲醇或80%乙腈水溶液中；正相色谱柱正相使用保存在纯正己烷中，反相使用时需将柱内存储液用异丙醇置换，zui后用正己烷保存。将色谱柱从仪器上取下，并将随柱的塑料堵头旋紧密封。

使用注意事项
液相色谱柱是液相色谱仪的心脏，有严格的生产标准和测试程序，为了充分发挥其性能，zui大程度延长其寿命，请仔细阅读此部分。
1.色谱柱使用前请先确认色谱柱内的存储液
月旭公司色谱柱的存储液，如没有特殊说明均为质检报告中所述流动相，氨基（NH2）、硅胶柱（SiO2）均为正相条件-正己烷/异丙醇体系，反相柱(C8、C18、Phenyl-Hexyl)均为甲醇/水体系，检测前，请用相互溶的试剂将其替换。
2.新的色谱柱平衡
月旭公司建议新的反相色谱柱用色谱级的纯甲醇以低流速冲洗色谱柱30个柱体积，再更换成能与检测流动相互溶的流动相冲洗30个柱体积，zui后用流动相稳定系统至基线平稳；新的正相色谱柱用色谱级的异丙醇以低流速冲洗30个柱体积，再更换成检测流动相稳定系统至基线平稳。
3.色谱柱的使用方向确认
月旭公司生产的液相色谱柱标签上的箭头方向为流动相流向，使用过程按此方向可以避免双向混用，导致两端填料同时污染，不利于色谱柱的再生和维护。
4.流动相和样品保持洁净
由于悬浮在样品或流动相中的细小颗粒会堵塞色谱柱两端的筛板，月旭公司建议各种试剂选用色谱纯级；如有少量的分析纯试剂，使用前建议用0.45μm孔径以下的滤膜过滤。

样品中的杂质是造成色谱柱污染、柱效下降的zui主要原因之一，复杂样品可选样品预处理柱（SPE柱）进行样品处理。如果不方便处理，使用相匹配的保护柱，样品溶剂与流动相要相匹配。不能出现样品不互溶，极性相差太大等想象，否则会造成色谱峰形变差，鬼峰等现象，使用流动相溶解样品能有效的避免上述情况发生。

5.色谱柱允许的pH范围
每款色谱柱都有自己特定允许使用的pH范围，在pH范围以外使用，会使硅胶基质溶解或键合相水解，对色谱柱造成不可恢复的损伤。如果在临界pH处使用，分析结束后立即用适合于色谱柱保存并与当前使用的流动相互溶的淋洗液置换掉。

TopsilTM 系列色谱柱pH耐受范围：

色谱柱维护
1.柱压升高
这是每个色谱工作者都很头疼的问题，长时间使用造成柱压的缓慢升高通常是正常现象；短时间甚至是突然的柱压升高通常是异常升高，排除仪器的故障，确定是色谱柱自身原因，一般有以下几点：
1) 柱头的过滤筛板污染(固体颗粒物堵塞、强保留物质累积)，解决方法
为：
a.在柱前端加上在线过滤器或保护柱，用甲醇/水=20/80 1.0ml/min反向冲洗色谱柱180min；
b.在柱前端加上在线过滤器或保护柱，反向使用；
c.可将柱头打开，将色谱柱头中过滤筛板取出，在稀硝酸溶液内超声清洗20min，纯水超声清洗20min，zui后用甲醇超声清洗20min，重新装入色谱柱。
2) 柱头填料污染(固体颗粒物堵塞、强保留物质累积)，解决方法为：
a.用可以溶解污染物的溶剂较长时间(180min)反向冲洗色谱柱；
b.可将柱头打开，小心取出被污染的填料，用相同的填料重新装入修复。
3) pH使用不当造成的损伤：
pH使用不当造成固定相的缺失或塌陷，很难使色谱柱恢复，只能更换色谱柱。

2.使用保护柱和在线过滤器
样品和流动相中不能*过滤掉及泵磨损、密封圈和管路老化产生的固体颗粒物，进入到色谱柱中就会堵塞筛板，导致柱压升高，柱效下降，保护柱和在线过滤器上都有筛板，孔径与分析柱的孔径相同，能阻止颗粒物到达色谱柱，在分析故障中，柱压升高占很大比例，因此建议您在色谱柱前端加上在线过滤器或者保护柱。
3.缓冲盐的正确使用
缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，使用不当会析出，加快泵柱塞杆和密封圈，流通阀的磨损，堵塞色谱柱头筛板，填料基质上的微孔和颗粒间的间隙，使填料板结柱压升高，阻碍基质上键合相的碳链自由舒展，使色谱柱保留能力下降，柱效降低，缩短其使用寿命，缓冲盐析出后很难去除，因此正确的使用缓冲盐对延长色谱柱的使用寿命非常重要，具体方法如下：“使用前过渡! 使用后冲洗!”

1) 等度条件：分析前后用过渡流动相冲洗柱体积不少于20-30个柱体积，或分析完成后用过渡流动相以0.2ml/min（根据柱规格调整）冲洗過夜；
2) 梯度条件：分析前，用与初始流动相组成相同的流动相以分析流速冲洗色谱柱不少于20-30个柱体积，分析后，用该过渡流动相冲洗色谱柱不少于20-30个柱体积，且梯度尽量平缓，避免缓冲盐析出；
过渡流动相：有机相和水相的比例和分析流动相中两相比例一致，或者水相比例高于分析流动相，不含缓冲盐。
3) 缓冲盐析出：
方案1：用甲醇/水＝10/90以分析速度流速35℃条件下反向冲洗色谱柱120min；
方案2：用甲醇/水＝10/90以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱過夜。

4.避免强保留物质在色谱柱保留
强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，是一个缓慢的过程，一段时间后会对样品成分产生额外的保留行为，引起峰变宽，拖尾，使柱效下降，保留时间变化，到一定程度时会导致柱压升高，对许多样品特别是复杂样品很难判断其是否含有强保留物质，因此要预防这一切的方式，坚持每天分析完成后用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱20个柱体积以上。

清洗方法：
1) 未使用缓冲盐，每天分析完成后用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱20个柱体积以上；
2) 使用缓冲盐，用上述方法去除缓冲盐后，用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱20个柱体积以上；
3) 补救方法：水–乙腈–异丙醇（或氯仿）–乙腈–水，每一步需要冲洗不少于30个柱体积。
注意：不要轻易打开柱头，一旦打开，很难恢复到新柱的水平。因为柱头打开而造成的检测后果，客户自行负责。

色谱柱再生
色谱柱作为液相色谱中昂贵的色谱耗材，会随着使用时间和进样次数的增加，会出现异常的色谱现象，如果一根色谱柱的柱效太低或者柱压太高，通常认为该色谱柱使用寿命已到，为了延长色谱柱的使用寿命，除了*按照每一款色谱柱的性能使用以外，适当的色谱柱再生是很有效的途径。
1.氰基（CN）色谱柱维护和再生
CN基柱属于中等极性的固定相，作反相色谱时操作和维护和C18柱*相同，增加水相比例，可以促进样品的洗脱。但是CN属于短链的键合相，水相比例太高易使CN键水解，尤其在色谱柱pH耐受范围以外，酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快。如果在这个条件下使用，需要按以下程序用15个柱体积溶液冲洗，如下：95%水/5%乙腈–THF四氢呋喃–95%乙腈/5%水并保持95%乙腈/5%水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min過夜冲洗。
在pH耐受范围条件使用时，也比较伤柱子，要注意冲洗，可以参照上述方法，时间可适当减少。柱子使用一定时间后，柱效下降，需要老化再生，再生时用15个柱体积的下列溶液冲洗：95%水/5%乙腈–THF四氢呋喃–95%乙腈/5%水再走流动相即可。

CN柱用于正相时，当柱子使用一定时间后，柱效下降，可清洗一下恢复柱性能，再生时用10个柱体积的下列溶液冲洗：氯仿–异丙醇–二氯甲烷再走流动相即可。
CN柱的pH范围在pH 2.0-8.0。
CN柱的保存，可用异丙醇或正己烷保存（保存溶剂中不能含水），两端封好，流动相改变时要注意过渡和两相之间的互溶。

2.反相柱再生
反相色谱柱是使用zui普遍的色谱柱之一，除按照以上内容使用以外，必要的再生清洗可以有效的延长色谱柱的使用寿命，用下列每种溶剂20~30个柱体积冲洗：
100％甲醇–100％乙腈–75％乙腈/25％异丙醇–100％异丙醇 –100％二氯甲烷–100％正己烷–100％异丙醇–100％甲醇
3.正相色谱柱的再生
正相氨基柱的键合官能团氨丙基要比C18、C8柱的键合官能团易水解，所以其使用寿命稍短，特别是使用反相条件时，要严格控制pH值范围，pH值越低流动相中水的比例越高越易发生水解。
注意：所有试剂都要严格脱水

用氨基柱检测酸性物质可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，一定程度上改变对某类的分析物保留性质或表现为柱效下降，再生建议是：

用5-10个的柱体积的含0.5-1.0％NH3的50-50乙腈-水溶液冲洗（冲洗后用不含碱的流动相洗去多余的氨），分析酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。
填料被样品中杂质累积污染，色谱柱表现行为柱压增高柱效降低等，依次用：甲醇–异丙醇–氯仿–正己烷–氯仿–异丙醇–甲醇冲柱子（各以0.5ml/min的流速，20个柱体积），再换流动相。
NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，尤其是在该柱子pH范围以外，在酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用10个柱体积溶液冲洗，也是正相条件下使用色谱柱的再生，建议：95％水/5％乙腈–THF四氢呋喃–95％乙腈/5％水，并保持95％乙腈/5％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min過夜冲洗。

反相使用氨基色谱柱的再生（每种淋洗液不少于30个柱体积）：NaOH(pH 9.0)–色谱纯水冲–平衡到流动相或者适合保存的溶液。
其它正相柱（硅胶柱，Diol柱）的再生（每种淋洗液不少于20个柱体积）：正己烷–异丙醇。
正相柱除水：含2.5% 二甲氧基丙烷(dimethoxypropane)和2.5%冰醋酸的正己烷冲洗30个柱体积。